為什么有些細(xì)胞實(shí)驗(yàn)無(wú)法重復(fù)？
為什么有的細(xì)胞在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間里，都養(yǎng)不到*狀態(tài)？
為什么實(shí)驗(yàn)室中，超過(guò)一株以上的細(xì)胞都時(shí)好時(shí)壞？
細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、細(xì)胞變形、碎片增加、懸浮細(xì)胞容易成團(tuán)、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)……
 
如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、細(xì)菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示——你的細(xì)胞可能被支原體污染了！
 
 
圖. 電鏡下的支原體
 
支原體污染普遍存在
據(jù)美國(guó)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，細(xì)胞發(fā)生支原體污染的幾率在 70% 以上。同時(shí)，由于支原體直徑很小，僅在 180nm~350nm 之間，只有通過(guò)電鏡才能看到，不易被實(shí)驗(yàn)者肉眼發(fā)覺(jué)，支原體污染逐漸成為一個(gè)普遍存在的問(wèn)題。
支原體污染的危害 
支原體污染是個(gè)循序的過(guò)程，普通抗生素對(duì)其無(wú)效。因此，支原體污染有多煩人，相信實(shí)驗(yàn)人都領(lǐng)教過(guò)了。

 

1、細(xì)胞狀態(tài)不佳，生長(zhǎng)速度慢，實(shí)驗(yàn)無(wú)法推進(jìn)。
2、細(xì)胞內(nèi) DNA、RNA 及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，時(shí)間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。
3、一株污染的細(xì)胞成為實(shí)驗(yàn)室的污染源，對(duì)工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進(jìn)而污染其他細(xì)胞，導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染，實(shí)驗(yàn)受影響，數(shù)據(jù)無(wú)法重復(fù)，預(yù)期結(jié)果出不來(lái)。

如何有效把支原體趕出細(xì)胞？
對(duì)于已耗費(fèi)很多時(shí)間、大量擴(kuò)增起來(lái)的細(xì)胞，或經(jīng)過(guò)基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過(guò)的細(xì)胞，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染了，怎么辦？由于前期工作量巨大，我們無(wú)法丟棄已有細(xì)胞。但由于價(jià)格原因，又無(wú)法使用那些昂貴試劑殺除細(xì)胞上的支原體，同時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員還需要清除細(xì)胞上的支原體污染，讓實(shí)驗(yàn)得以往下推進(jìn)，以zui終獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)驗(yàn)者可選用對(duì)支原體的抑制劑，通過(guò)對(duì)細(xì)胞的前期處理，中期加藥，逐步通過(guò) 4 代左右的培養(yǎng)，從而將支原體污染*清除，確保試驗(yàn)順利推進(jìn)，結(jié)果準(zhǔn)確。*此類試劑眾多，締一生物生物周圍的實(shí)驗(yàn)人做過(guò)很多嘗試，其中效果zui確切且性價(jià)比很高的當(dāng)屬德國(guó) Minerva 公司的 ZellShield®祛除劑。


Zell Shield®是一種即用型新型復(fù)合抗生素，副作用極低，能有效地祛除細(xì)胞培養(yǎng)支原體、細(xì)菌、真菌污染。Zell Shield®使用方法簡(jiǎn)單，直接加入培養(yǎng)基中保護(hù)細(xì)胞。
它的原理：通過(guò)抑制支原體增殖中某種蛋白的合成，達(dá)到抑制新的支原體增殖的目的。屬?gòu)?fù)合型的新型抗生素。它廣泛適用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。

特點(diǎn)
1、適用范圍廣
普通細(xì)胞培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)
2、無(wú)細(xì)胞毒性
目前，Zell Shield®對(duì)多種細(xì)胞系都無(wú)細(xì)胞毒性。
3、廣譜
祛除支原體效果明顯，同時(shí)對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、病原蟲、真菌等污染亦可有效預(yù)防。
4、操作簡(jiǎn)便
可直接加入到預(yù)處理的培養(yǎng)基或細(xì)胞中進(jìn)行消毒。
5、穩(wěn)定性高
在細(xì)胞孵育期內(nèi)，Zell Shield®始終保持穩(wěn)定的活性。
6、低耐藥風(fēng)險(xiǎn)
精心挑選的新型復(fù)合抗生素只有極低的耐藥風(fēng)險(xiǎn)，多種抗生素聯(lián)合使用幾乎不會(huì)產(chǎn)生耐藥突變株。

操作步驟：
 

*步：研究發(fā)現(xiàn)，98% 的支原體污染發(fā)生在細(xì)胞間隙。因此，首先要把細(xì)胞消化下來(lái)，放入離心管，懸浮沖洗，離心，棄上清，反復(fù)三次。此時(shí)可將細(xì)胞上大部分的支原體去除，為進(jìn)一步加藥抑制做好準(zhǔn)備。
第二步：培養(yǎng)液中加入 1% 的 ZellShield®，細(xì)胞進(jìn)行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制，舊的支原體隨著細(xì)胞的換液逐步減少，通過(guò) 4 代左右的培養(yǎng)，細(xì)胞中的支原體基本可被*清除。
注：使用 ZellShield®時(shí)，不需使用鏈青霉素。
此試劑價(jià)格約 2200 元/50 ml，可保證大量細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)得以順利推進(jìn)。
總之，細(xì)胞培養(yǎng)中，支原體污染發(fā)生頻繁。有時(shí)帶來(lái)的危害會(huì)造成實(shí)驗(yàn)的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測(cè)和及時(shí)排除支原體污染，讓細(xì)胞在健康安全的環(huán)境下生長(zhǎng)，為獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，打下良好的基礎(chǔ)。
附：關(guān)于德國(guó) Minerva 公司
 

Minerva Biolabs GmbH 公司是世界的微生物污染控制公司，特別是支原體和軍團(tuán)菌的技術(shù)和產(chǎn)品，在世界上遙遙。公司總部設(shè)立于德國(guó)柏林，專注微生物污染檢測(cè)與清除產(chǎn)品的研發(fā)和銷售。
締一生物生物 (Vian-saga), 是德國(guó) Minerva 公司十年來(lái)在中國(guó)的*合作伙伴，一直被國(guó)內(nèi)生物界譽(yù)為「值得持續(xù)信賴的供貨商」。為國(guó)內(nèi)眾多科研機(jī)構(gòu)、生物藥廠提供的支原體污染祛除保障，同時(shí)，更以、可靠的*血清，為國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室提供堅(jiān)實(shí)有力的試劑支持。