限定化學(xué)成分培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基中的素有成分都是明確的,它同樣不含有動(dòng)物蛋白,化學(xué)限定培養(yǎng)基同樣也不是添加了植物水解物,而是使用了一些已知結(jié)構(gòu)與功能的小分子化合物,如短肽、植物激素等.這種培養(yǎng)基更有利于分析細(xì)胞的分泌產(chǎn)物.目前已經(jīng)有適合于293細(xì)胞、CHO細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的CDM問(wèn)世。
一、常規(guī)培養(yǎng)和傳代
1）在聚碳酸酯Erlenmeyer搖瓶中預(yù)平衡足量化學(xué)限定培養(yǎng)基1小時(shí)。
2）確定活細(xì)胞密度。
3）調(diào)整搖瓶工作體積（見(jiàn)英文說(shuō)明書(shū)表2）。
4）接種細(xì)胞密度為3×105細(xì)胞/ml
5）5%CO2，37℃培養(yǎng)。
6）細(xì)胞密度達(dá)到15-40×105細(xì)胞/ml時(shí)，進(jìn)行傳代。通常間隔為3-4天。
7）如果細(xì)胞密度太低，或細(xì)胞在適應(yīng)期不生長(zhǎng)，則在4天后進(jìn)行離心，更換培養(yǎng)基。
對(duì)某些細(xì)胞系，無(wú)須預(yù)平衡，而2-8℃的培養(yǎng)液效果更好。
二、從血清到無(wú)血清培養(yǎng)的過(guò)渡
1.離心足量細(xì)胞，細(xì)胞懸液密度為4-6×105細(xì)胞/mL，115×g，5分鐘
2.細(xì)胞在含2%胎牛血清的培養(yǎng)基中重懸培養(yǎng)（必要時(shí)含6-8mM谷氨酰胺）。
3.細(xì)胞每2-4天傳代或更換培養(yǎng)液。
4.在傳代至少3次后降低血清濃度為0.5%。
5.細(xì)胞每2-4天傳代或更換培養(yǎng)液。
6.在2-4代后血清濃度降為0%
7.繼續(xù)培養(yǎng)直到細(xì)胞存活率＞90%
8.適應(yīng)后的細(xì)胞應(yīng)在化學(xué)限定培養(yǎng)基中以2-5×105細(xì)胞/ml接種。培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)在每3-4天稀釋一次。由于HEK細(xì)胞容易積聚，培養(yǎng)物應(yīng)攪動(dòng)或搖晃，采用轉(zhuǎn)瓶或搖瓶系統(tǒng)。
400-166-8600
當(dāng)前位置：