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如何提高細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的存活率

更新時(shí)間:2022-01-25  |  點(diǎn)擊率:1003

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)現(xiàn),使得很多研究不必局限于在動(dòng)物或人體內(nèi)進(jìn)行,試驗(yàn)環(huán)境更為簡(jiǎn)單,目的更為明確,如:細(xì)胞內(nèi)活動(dòng)的基礎(chǔ)研究;細(xì)胞與細(xì)胞相互作用;細(xì)胞與環(huán)境間的相互作用;遺傳學(xué)與細(xì)胞轉(zhuǎn)化;細(xì)胞產(chǎn)物和分泌等等。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展很大程度上是由醫(yī)學(xué)研究的需求而促進(jìn)的,如:抗病毒疫苗的研究,腫瘤發(fā)生及治療的研究;基因重組技術(shù);單克隆抗體技術(shù);組織工程;染色體分析等體外檢測(cè)技術(shù),以及體外輔助生殖技術(shù)。


在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,除了細(xì)胞本身的生長(zhǎng)特性,環(huán)境也會(huì)影響細(xì)胞的狀態(tài)。

1:細(xì)胞生長(zhǎng)的附著物或支持物性質(zhì)(如:細(xì)胞培養(yǎng)瓶/板或細(xì)胞培養(yǎng)載體);

2:細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)和成分;

3:氣相成分;

4:培養(yǎng)溫度等。合適的培養(yǎng)環(huán)境才可以使細(xì)胞表現(xiàn)出特定的功能。

無(wú)論是原代培養(yǎng)還是細(xì)胞系的傳代培養(yǎng),都要定期更換培養(yǎng)基。而傳代培養(yǎng)過(guò)程中,細(xì)胞通常遵循一種標(biāo)準(zhǔn)的方式生長(zhǎng):接種后經(jīng)過(guò)一段潛伏期進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期,即對(duì)數(shù)期,在這一階段細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)最好。此后細(xì)胞密度將逐漸增加到鋪滿整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板/皿/瓶有效基質(zhì),當(dāng)細(xì)胞濃度超出培養(yǎng)基的能力時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)速度將大大減慢,這時(shí)可以選擇更換培養(yǎng)液或進(jìn)行分瓶培養(yǎng),也就是傳代。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)由于機(jī)械力保持細(xì)胞在懸浮狀態(tài),培養(yǎng)和傳代過(guò)程也不需要胰蛋白酶消化,但是無(wú)論哪種情況,都有相似的生長(zhǎng)周期。

細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素:

1.要保證無(wú)菌,包括無(wú)菌操作,無(wú)菌環(huán)境.槍頭等要及時(shí)滅菌,培養(yǎng)瓶,移液管最好使用一次性的,如果你的細(xì)胞比較不好養(yǎng),最好使用一次性的.
2.要傳代的時(shí)候細(xì)胞傳代的數(shù)量不能太少,否則細(xì)胞不容易養(yǎng)活.另外,傳代不要過(guò)度頻繁,即使是腫瘤細(xì)胞.
3.不要經(jīng)常用胰酶消化細(xì)胞,且消化時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng).
4.根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況,即使更換新鮮培養(yǎng)基.
5.血清一般要凍存在-20攝氏度,用的時(shí)候在4攝氏度融化,不要反復(fù)凍存,最好用10ml的離心管分裝使用.


科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級(jí)胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。


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