細(xì)胞克隆率的測定是評價(jià)胎牛血清功能的兩大方法之一。本文締一生物/締一生物專家為您分析美國藥典關(guān)于胎牛血清細(xì)胞克隆率測定的描述。

　　該檢測主要是評估貼壁細(xì)胞系的*生長狀況。要分析細(xì)胞在合適生長條件下的增殖能力和單細(xì)胞的存活狀況，細(xì)胞在低密度下的接種效率或克隆形成是一個(gè)優(yōu)先選擇的方法。對于評估血清批次的品質(zhì)，這是一個(gè)非常靈敏的檢查。該技術(shù)反映出細(xì)胞群體的生長速率差異，并可區(qū)分生長速率的變化（克隆大?。┖图?xì)胞是否存活（克隆數(shù)量）。因?yàn)榇嬖谝恍┘?xì)胞的不均一性，因此需記住，細(xì)胞在低密度時(shí)，要長成單獨(dú)的克隆，其生長表現(xiàn)會(huì)很不一樣。因此，即使在*生長條件下，由于細(xì)胞之間的相互作用沒有了，也很少有細(xì)胞能存活。克隆形成是一個(gè)測定細(xì)胞存活的實(shí)驗(yàn)，也用于優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)條件（培養(yǎng)基和血清的選擇）。如果能證實(shí)一個(gè)克隆來自一個(gè)細(xì)胞，那么克隆效率就可以確定下來。

　　樣本：對于每個(gè)血清批次，加20mlFBS到180mlEMEM中，0.22mm過濾除菌，4℃保存。

　　細(xì)胞制備：該實(shí)驗(yàn)只用于貼壁細(xì)胞 （如HFL1 and Mv 1 Lu）。一周前開始制備，2-3天換液。具體制備請參考文章《如何準(zhǔn)備用于生長促進(jìn)曲線測定的細(xì)胞》。

　　分析：以低密度接種細(xì)胞（2–50個(gè)細(xì)胞/cm2），接下來固定，染色，計(jì)數(shù)。

　　1、對每個(gè)細(xì)胞系和每個(gè)批次血清，標(biāo)記10個(gè)直徑60mm的平皿。標(biāo)記在平皿的側(cè)壁靠下部分，包括對照。

　　2、每個(gè)平皿加入5ml含10%待測FBS的培養(yǎng)基，加入400個(gè)細(xì)胞。

　　3、在細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃，5%CO2孵育10-14天。

　　4、棄掉上清，加入足量石炭酸復(fù)紅-亞甲基藍(lán)溶液，覆蓋每個(gè)平皿，作用10分鐘。

　　5、棄掉染液，用蒸餾水沖洗幾遍。平皿倒置在吸水紙巾上，風(fēng)干。

　　計(jì)數(shù)并記錄陽性克隆數(shù)，以及陽性染色克隆的總表面積（mm2）。計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

　　接受標(biāo)準(zhǔn)：接種效率%=克隆數(shù)÷接種細(xì)胞數(shù)×100，比較FBS批次之間的結(jié)果，選擇一個(gè)好的批次用于某個(gè)特定細(xì)胞的培養(yǎng)。

　　綜上所述，您是不是已經(jīng)對美國藥典關(guān)于胎牛血清細(xì)胞克隆率測定的描述，有所了解。如果還有其他疑問，請咨詢締一生物/締一生物資深專家。